东方健康网，健康行业门户网！

研究团队通过全二维生物色谱分析系统，筛选出连花清瘟提取物和人尿液样品潜在的ACE2靶向成分。最终，找到了8种高暴露于人体且具有潜在ACE2靶向能力的连花清瘟胶囊成分：新绿原酸及其异构体，苦杏仁苷，野黑樱苷和连翘甙I，芦丁，连翘苷A，甘草甜素和大黄酸。

　　然而，这种方法只是复杂化学样本的初步筛选，候选活性成分和ACE2之间的相互作用参数还需进一步确认。

　　8名“种子选手”的三重筛选

　　确认候选活性成分是否具有ACE2靶向作用至关重要。已有研究表明，筛选具有ACE2靶向能力的药物，有望用于治疗新冠肺炎患者。

　　该论文介绍，新冠病毒通过其刺突蛋白(S蛋白)与作为人受体的血管紧张素转化酶2(ACE2)结合，从而感染人体。ACE2是一种负调节因子，具有维持肾素-血管紧张素系统(RAS)稳定的能力，对所有器官的生理或病理至关重要。ACE2已被发现广泛分布于心脏、肾脏、睾丸、脂肪组织、脑组织、血管平滑肌细胞，以及胃肠道。

　　为了确认候选成分与ACE2间的相互关系，针对初步发现的8名“种子选手”，研究团队又进行了三重筛选。

　　第一重筛选，研究团队对候选成分进行了表面等离子分析(SPR)，以验证其对ACE2重组蛋白的亲和力。这一轮中，苦杏仁苷和野黑樱苷脱颖而出。

　　平衡解离常数KD值越大意味解离越多，候选成分与 ACE2的亲和力越弱。研究发现，苦杏仁苷(Amygdalin)和野黑樱苷(Prunasin)具有较强的ACE2结合亲和力，KD 值分别为0.221和0.268 μmol/L。野黑樱苷是苦杏仁苷在体内主要的代谢物，在人血清中的暴露量很高。

　　甘草甜素(glycyrrhizin)曾被认为是新冠肺炎的有效治疗药物，具有潜在的ACE2结合活性。这项研究确认了甘草甜素的KD值为4.39 μmol/L。

　　连翘苷A(forsythoside A)和连翘苷I(forsythoside I)是连翘果实中的主要成分，其对ACE2的亲和力被分别测定为15.8 and 18.7 μmol/L。大黄酸(rhein)是另一种在人血清中高暴露的组分，它对ACE2的亲和力适中，KD值为33.3 μmol/L.。

　　第二重筛选，研究团队进行了ACE2活性抑制试验，通过ACE2抑制剂筛选试剂盒，测试了候选成分对ACE2活性的影响。结果发现，与ACE2结合亲和力较强的两个组分野黑樱苷(prunasin)和甘草甜素(glycyrrhizin)，均未表现出明显的肽酶抑制作用，但是，大黄酸(Rhein)“表现突出”。

　　试验发现，大黄酸(Rhein)和大黄素-8-O-β-d-葡萄糖苷(emodin 8-O-β-d-glucoside)具有良好的ACE2抑制作用，IC50分别为18.33和22.50μmol/L，(如图1C所示)。值得一提的是，大黄酸(rhein)在人体内暴露程度高，具有良好的活性，这说明其可能是连花清瘟发挥ACE2抑制作用的主要活性成分。

　　图1.候选成分对ACE2酶活性的抑制作用。

　　(A)阳性药物MLN-4760

　　(B)连翘的候选成分

　　(C)大黄原植物

　　(D)金银花/烤苦杏仁/甘草根